Construction et production de Vecteurs lentiviraux

Les vecteurs lentiviraux sont dérivés du virus de l’immunodéficience humaine (VIH). Ils ont la capacité d’intégrer leur génome dans une cellule (max 8kb) mais ont été délestés de leur capacité réplicative. De ce fait, l’ADN intégré à la cellule sera transmis au cours de la division cellulaire aux cellules filles sans production de particules virales.

La production est effectuée par transfection transitoire de plasmides helpers et du plasmide contenant votre transgène dans des cellules humaines. Les particules virales seront produites par l’utilisation de la machinerie cellulaire et récupérées par ultracentrifugation.
Vous pouvez nous confier la construction de votre plasmide-transgène, ou nous donner directement votre plasmide déjà construit.

3 tailles de productions vous sont proposées :

  • mini production : environ 50µL de vecteur viral ;
  • maxi production : environ 150 à 200µL de vecteur viral ;
  • giga production : environ 300 à 400µL de vecteur viral.

3 Types de titrations sont à votre disposition :

  • titration en ELISA de détection de la protéine de capside P24 (quantification de la quantité de particules physiques) ;
  • titration par qPCR après infection de cellules (Quantification du nombre de particules virales capables d’infecter une cellule) ;
  • titration par cytométrie en flux si présence d’un fluorochrome (Quantification du nombre de cellules infectées capables d’exprimer le transgène intégré).